一、产品概述由艾美捷Bethyl Laboratories推出的NCoR抗体货号A301-145A是一款靶向人类核受体辅阻遏蛋白1NCoR中间区域第1525–1575位氨基酸的兔源多克隆抗体。该抗体以全IgG形式提供经抗原亲和纯化未偶联标记物浓度为1000 µg/ml适用于染色质免疫沉淀ChIP、免疫沉淀IP及蛋白质印迹WB等多种应用场景是研究核受体介导的转录抑制、组蛋白去乙酰化及染色质重塑机制的重要工具。二、关键规格参数2.1 免疫原与表位特异性免疫原对应人类核受体辅阻遏蛋白1NCOR1第1525至1575位氨基酸之间的区域参考序列号为NP_006302.2GeneID 9611。该区域位于蛋白的中部结构域远离N端的SANT结构域和C端的HDAC结合区可有效识别全长NCoR蛋白同时避免与其他含类似重复序列的蛋白如NCoR2/SMRT发生非预期交叉反应。2.2 物理与生化性质参数 | 详情靶点 | NCoR核受体辅阻遏蛋白1宿主 | 兔克隆性 | 多克隆形式 | 全IgG纯化方式 | 抗原亲和纯化使用固定化表位浓度 | 1000 µg/mlA280法测定1 mg/ml IgG吸光度1.4缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液pH 7-8含0.09%叠氮钠同型对照 | IgG抗原种属 | 人类反应种属 | 该信息未明确列出免疫原为人源建议在人类样本中验证对小鼠NCoR可能有交叉反应需自行测试2.3 储存与稳定性储存于2–8°C严禁冷冻。自收货之日起有效期一年。缓冲液中的叠氮钠可作为抗菌防腐剂但在用于ChIP实验前建议通过透析或稀释降低叠氮钠浓度通常至0.01%以下以免影响染色质片段化或后续酶反应。三、应用方法与推荐用量3.1 染色质免疫沉淀ChIP推荐用量2 µg 抗体 / 每次ChIP反应。适用技术ChIP-qPCR 或 ChIP-seq。注意事项染色质片段化推荐使用超声或微球菌核酸酶消化片段长度控制在200–600 bp。建议每ChIP反应使用10–25 µg 染色质以DNA含量计。需设置阴性对照兔IgG和阳性对照如抗H3K4me3或抗RNA Pol II抗体。3.2 免疫沉淀IP推荐用量6 µg 抗体 / mg 总蛋白裂解液。操作要点使用非变性裂解液如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris pH 7.5并补充蛋白酶抑制剂。推荐4°C旋转孵育2–4小时或过夜。使用蛋白A/G琼脂糖珠或磁珠捕获免疫复合物。3.3 蛋白质印迹WB推荐稀释比1:500 – 1:1000。特殊凝胶建议推荐使用3-8% Tris-乙酸盐Tris-acetate梯度凝胶因为NCoR蛋白分子量较大约270 kDa传统Tris-甘氨酸凝胶难以有效分离高分子量蛋白。标准操作流程封闭液与抗体稀释液含5%脱脂牛奶的TBST。一抗孵育推荐4°C过夜。二抗系统对于细胞裂解液直接WB使用山羊抗兔IgGHL抗体货号A120-101P对于IP产物的WB必须使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清货号S100-020以降低重链干扰。四、产品背景与生物学意义4.1 NCoR的功能机制核受体辅阻遏蛋白NCoR又称NCOR1是核受体转录抑制的核心调控因子。它通过以下机制介导基因沉默1. 核受体结合与未配体的甲状腺激素受体、视黄酸受体、雌激素受体、雄激素受体、孕激素受体及糖皮质激素受体等互作。2. 募集辅阻遏复合物通过C末端结构域与SIN3A/SIN3B结合进而招募组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC2。3. 染色质致密化HDAC去除组蛋白乙酰基使染色质结构紧缩抑制转录因子进入DNA。NCoR在发育、代谢、炎症及癌症中均有重要功能。4.2 研究应用方向研究方向 | 应用方式 | 说明核受体信号转导 | ChIP-qPCR | 检测NCoR在特定基因启动子或增强子上的富集变化观察激素处理后的解离/招募表观遗传调控 | ChIP-seq | 全基因组水平分析NCoR结合图谱识别辅阻遏网络蛋白-蛋白相互作用 | IP WB | 验证NCoR与HDAC1、HDAC2、SIN3A或核受体的内源结合蛋白表达水平检测 | WB | 比较不同组织、处理或疾病状态下NCoR蛋白表达量